pcr产物试剂盒回收「pcr试剂盒的使用方法」-上海生物商贸有限公司

各位朋友，大家好！小编整理了有关pcr产物试剂盒回收的解答，顺便拓展几个相关知识点，希望能解决你的问题，我们现在开始阅读吧！

pcr产物回收试剂盒是不是片段越小越难回收

如果确定PCR产物很纯（没有引物二聚体），完全可以用PCR产物纯化试剂盒。如果PCR产物不是很纯，或者PCR扩增条带比较小，PCR产物前面又有较多引物二聚体时，用胶回收，其余用PCR产物纯化试剂盒。

设计所需扩增基因的引物，才能扩增出你所需要的片段啊。试剂问题、操作问题、样品问题。PCR后电泳检测的结果，此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率如果片段较大。

你看看甲的酶切使用的酶是不是被DNase污染了。换一家公司的内切酶试试。还有，二者的PCR产物大小有没有区别？各个公司的胶回收试剂盒对回收的DNA的大小是有一定要求的，有的适合回收大片段，有的适合回收小片段。

会的，可能还会影响到260/230的值，如果下一步有连接或酶切的话，体系中残留的有机溶剂会对下一步反应的酶类产生影响，降低活性。混得不多的话，就算了。

首先过短的PCR产物纯化困难，一般的PCR产物纯化试剂盒都要求PCR产物片段大于150bp，过短的 PCR产物纯化和准确定量都非常困难。因此我们要求用于测序的PCR产物一般不低于150bp长度。

1、可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K，37度1h，酚/氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，5体积的无水乙醇沉淀回收。

2、可以用回收试剂盒。举例如下：DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒，回收步骤如下：在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。

3、DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。

4、对于酶切产物仍为单一DNA片段的情况，如目的基因PCR产物酶切后，往往只切除掉了几个保护碱基，可以直接向酶切产物中加入3倍体积的溶胶液GSB，按照后续步骤回收即可。若酶切体系小于100ul，建议先用ddH，O将体系补足至100ul。

5、将PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳，将目的产物的条带用刀片切下来，用一定的溶剂把胶溶解，然后回收溶液中的DNA片断，这个就是胶回收。至于具体的操作步骤和溶液，都有现成的试剂盒卖的。很多生物技术公司都做。

两者的区别应该在于回收柱上面的滤芯（亲和柱）对目标DNA分子的吸附力以及透过率相关。一般情况下PCR纯化试剂盒需要收集的DNA分子片段较小。

DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。

如果没有其他杂带就可以。单一条带的PCR产物，如果酶切后也只有一条带，就可以用产物回收试剂盒回收。但如果酶切后有杂带或多条带，就只能做胶回收。

胶回收是胶回收，纯化是纯化。胶回收的过程也能达到纯化的目的，只是因为要跑胶要稍麻烦些，一般用于产物特异性不大好时。

以上内容就是解答有关pcr产物试剂盒回收的详细内容了，我相信这篇文章可以为您解决一些疑惑，有任何问题欢迎留言反馈，谢谢阅读。