包含生工taq酶要加什么试剂的词条-上海生物商贸有限公司

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有谁知道做RT-PCR需要哪些试剂?不买试剂盒的话,谢谢

需要购买的做pcr扩增用的试剂： PCRmix，或者酶，dntp等，电泳的试剂：胶，buffer，核酸染料，marker。如果做荧光定量或者测序，需要荧光修饰的引物，还得合成。耗材：pcr板，吸头，pcr管。还有很多别的东西。

高压过的超纯水，高压灭菌过的蓝色、白色和黄色枪头，100ul、500ul和1ml离心管，大量的话需要排管（12连管），放置离心管用的的架子（96孔板等）。PCR最好在冰上进行，所以准备冰盒。

钟鼎生物技术公司基于与客户合作的实际案例，介绍了RT-PCR的实验流程，包括RT-PCR实验所需试剂耗材、RNA提取、RNA反转录为cDNA。实验摘要使用TRIzol提取样品总RNA，反转录获得cDNA，供下游实验使用。

RT-PCR检测方法的具体步骤如下：（一）RNA提取根据标本数量分装RLT液：从Kit中取出RLT液，用5mL离心管分装，每管500μL（在体系配制区操作）。

在PCR反应中，BSA 对于减少污染物，例如酚类化合物（phenolic compounds）有一定帮助。而且也有说法是它能减少反应物附着在试管壁的情况。在PCR反应中，通常BSA添加的浓度可达到0.8 mg/ml。

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

RT-PCR中，逆转录酶是以RNA为模板的DNA聚合酶。缓冲体系不同：由于聚合酶不同，两者相应的反应buffer （RB）也略有不同。因为PCR有级联放大效应，buffer成分可能更复杂，以保证能减少非特异扩增。

DMSO可以提高PCR的特异性，帮助扩增一些难扩的模板。但要摸索，量大的话会抑制扩增，而且最好用于扩增1KB以上模板。

加入DMSO利于减少DNA的二级结构，使G、C含量高的模板易于完全变性，在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行。

dmso在实验中的作用有：低温防护，作为缓冲液的成分，回收膜过滤后的DNA和神经保护。低温防护：DMSO广泛应用在人、动物细胞株及细菌噬菌体λ的低温防护中。

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