引物纯化试剂（引物纯化方式opc）-上海生物商贸有限公司

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什么是PCR试剂

PCR扩增试剂：主要是DNA聚合酶酶、四种碱基、缓冲试剂、引物等；产物检测试剂：琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等等。

PCR是一种DNA体外快速扩增的技术，PCR试剂就是进行PCR实验用的试剂。

一种PCR反应的化学试剂。PCR缓冲液（Buffer）是一种PCR反应的化学试剂，在PCR实验中起到重要的作用，能够提高PCR反应的效率和特异性。

按试验方法可以分为普通PCR试剂盒（定性），荧光定量PCR试剂盒（定量）。荧光定量PCR试剂盒根据染料又分为SYBEGREEN法，探针法等。根据模板的类型分为DNA类PCR试剂盒和RNA类PCR试剂盒。

聚合酶链式反应 (PCR) 是一种基本的分子生物学技术，可准确扩增和量化极低水平的核酸，目前用于多种应用，包括 SNP 鉴定、基因分型、传染病鉴定、遗传指纹图谱、DNA 测序和克隆，以及基因表达。

简称PCR。聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

参加PCR反应的物质主要有五种即：引物、酶、dNTP、模板和缓冲液。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。

Q-PCR 实验流程实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开 15-20 分钟。2超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA 抽提需带口罩。

pcr需要的原料有：物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液。

操作人员进入试剂配置区或者单独的洁净实验室。

引物设计优化。通过优化引物的序列设计，可以减少或避免发夹结构的形成，可以使用一些在线工具或软件来评估引物的二级结构和互补性，确保引物之间没有过多的互补碱基，避免形成发夹结构。

每条引物自身不应有稳定的发夹结构。引物自身不应存在互补序列是说引物中没有发夹结构之类的，引物之间不应存在互补序列是说个几种引物之间都不能互补配对。

博凌科为-为你解可能原因：PCR引物设计较差建议解决方法：避免在引物3端含有互补序列。避免可以形成内部发卡结构的序列。设计Tm类似的引物。

将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。序列选取应在基因的保守区段避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构典型的引物18到24个核苷长。

第一轮PCR，加入针对adaptor1和adaptor2外侧序列的特异引物进行扩增。

可以做个梯度PCR或降落PCR，来摸索一个合适的退火温度，也可有效地减少二聚提的出现。引物设计可以使用Primer Premier 0，操作比较简便，同时它可以自动分析引物是否有发夹结构、引物二聚体等，非常方便。

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