sds-page所有详细试剂配方_sdspage试剂盒-上海生物商贸有限公司

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SDS-PAGE的操作步骤

1、（3）为了电泳方便起见，也可以采用整个SDS-PAGE过程恒压的方式，通常把电压设置在 100V，然后设定定时时间为90－120分钟。设置定时可以避免经常发生的电泳过头。

2、western blot操作流程如下：收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制。

3、这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

按20：1体积比加入1M DTT溶液，如1ml蛋白上样缓冲液(5*)中加入50ul的1M DTT，混合均匀。再按每4份蛋白样品加入1份混合好的蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液。

器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。实验操作；样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul+5ul)在一个eppendorf 管中混合。放入100℃加热5-10min，取上清点样。

在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液（5X）。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液（5X）的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液（5X）。

SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。

*SDS-PAGE电泳缓冲液 0.125M tris 11g， 25M glycine 94g，0.5% SDS 0g，加入800ml去离子水，搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。用的时候稀释成1*的就可以了。

X加样缓冲液：0 mol/L Tris缓冲液25ml，甘油4ml，SDS 0.5g，巯基乙醇250ul，溴酚蓝25mg，H2O定容至5ml混匀备用。

1、其配制步骤如下：将250 mM Tris-HCl (pH 8) 和10 % (W/V) SDS 分别称取一定量，放入10 mL塑料离心管中。加入0.5 % (W/V) BPB，称取一定量，放入上述离心管中。

2、配制过程：量取1M Tris-HCl （pH8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚兰1 ml；加入去离子水定容至10 ml；分装；在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。

3、用时可以用双蒸水溶解成1L，配成10倍浓缩液，用时再稀释10倍，配好的电泳液用于SDS－PAGE蛋白电泳，可反复使用三到五次，如果发现有明显沉淀或者漂浮时，请丢弃换新的。

小伙伴们，上文介绍sds-page所有详细试剂配方的内容，你了解清楚吗？希望对你有所帮助，任何问题可以给我留言，让我们下期再见吧。