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pcr产物回收试剂盒不能完全纯化「pcr清洁回收试剂盒」

各位访客大家好!今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于pcr产物回收试剂盒不能完全纯化的问题,于是小编就整理了几个相关介绍的解答,让我们一起看看吧,希望对你有帮助

pcr纯化试剂盒可以纯化掉酶吗

酶切后的质粒是已经经过酶切处理的DNA片段,其长度和序列与PCR产物不同。因此,PCR产物纯化试剂盒通常不适用于纯化酶切后的质粒。

 pcr产物回收试剂盒不能完全纯化「pcr清洁回收试剂盒」-图1

不是的,pcr纯化试剂盒—是直接水溶解的pac产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。

所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化,这样虽然工作量比较大,费钱,但基本可以保证一次成功,总体看来还是省时省力的。

可以适当纯化一下,用试剂盒纯化或者直接用乙醇沉淀一下,去掉盐,蛋白(TAQ酶),小片段的引物及dNTP等。再进行酶切。直接酶切可能不成功,盐离子等浓度不对。如果有多个条带或者引物带很严重,可能得切胶回收了。

现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。

 pcr产物回收试剂盒不能完全纯化「pcr清洁回收试剂盒」-图2

使用普通的产物纯化试剂盒纯化即可,只不过对回收产物的纯度和浓度要求都稍高。纯度越高,浓度越大,测序成功的可能性就越大。

pcr产物纯化试剂盒可用于纯化酶切后的质粒吗?

pcr纯化试剂盒可以纯化掉酶 首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。

单酶切要看有几个切点,如果只有一个切点的话,可以直接纯沉或是使用PCR产物纯化试剂盒就可以了。如果是双切点的话,需要走琼脂糖凝胶,分离出你需要的DNA,使用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行DNA回收。

PCR产物纯化试剂盒原理是利用硅胶膜或离子交换树脂等材料对PCR产物进行分离和纯化。贝克曼AMPure XP核酸纯化试剂盒可用于 PCR产物和DNA纯化、NGS文库纯化领域。

 pcr产物回收试剂盒不能完全纯化「pcr清洁回收试剂盒」-图3

PCR产物回收后不纯,可以再接着用回收产物跑胶回收吗?请高手赐教,谢谢...

不可以。pcr产物回收是基因工程操作中的一项重要技术。该技术产生查危害物质多,为保证群众的健康安全,所以该技术回收后是不可以继续跑pcr的。该技术在改善群众生活方面起到非常重要的作用。

可以的,可以将目的大小的片段回收下来再跑胶,但是DNA回收以后量会有所减少,所以第一次回收时要保证DNA的量足够多,这样再跑一次才能得到足够的DNA。

PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。

可以的,pcr的程序设置一般都是终止在4℃,也就是说pcr结束时,实际已经是4℃了,所以不存在降温跑胶的事情,直接拿出产物就可以跑胶了。pcr结束可以立刻跑胶,也可以冻存稍后跑胶。如果近期它要用的话就放4度就可以。

(3)有些酶切产物酶切后仍为单一的 DNA片段,不需要进行跑胶回收,如目的基因PCR产物酶切后,往往只切除掉了几个保护碱基。这种情况下,直接向酶切产物中加入3倍体积的溶胶液GSB,按照后续步骤回收即可。

所以你最好去买PCR产物纯化试剂盒,这个方法现在只是没有试剂盒的情况下应急的。如果是PCR产物跑胶后有两条以上的带,那么你就得切胶回收目的片段,推荐这个时候还是买切胶回收试剂盒,传统法不是没有,但现在用的太少。

胶回收试试剂盒可以直接纯化pcr产物吗

1、不是的,PCR纯化试剂盒—是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。

2、如果没有特异性扩增,只是除去杂质,那么PCR产物纯化试剂盒纯化一下。

3、如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收,可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1体积的醋酸钠,5体积的无水乙醇沉淀回收。

4、胶回收是胶回收,纯化是纯化。胶回收的过程也能达到纯化的目的,只是因为要跑胶要稍麻烦些,一般用于产物特异性不大好时。

5、不是。根据律渐查询显示,胶回收产物是pcr,是未纯化的,因为又引入了酶,引物等,纯化,即由多种物质的聚集体,通过物理、化学或生物方面的方法作用,变成一类或一种物质的过程。

小伙伴们,上文介绍pcr产物回收试剂盒不能完全纯化的内容,你了解清楚吗?希望对你有所帮助,任何问题可以给我留言,让我们下期再见吧。

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