ta克隆是什么-上海生物商贸有限公司

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TA克隆的具体原理是什么?

Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。

PCR克隆是将目的基因经过PCR扩增后直接连接在载体上的克隆技术，相对于传统分子克隆，PCR克隆有着其独特的优势，不需要特意寻找合适的酶切酶；不需要使得目的基因和载体之间兼容匹配；需要较少的DNA等。

大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3末端添加一个 A 的特性，故可以与有突出“T”的载体相连，这就是TA克隆的原理。

BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。

Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA 拓扑异构酶I。

根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。

1、TA克隆把PCR片段与具有3-T突出端的载体DNA连接起来的实验方法。T载体是带有3-T突出端的开环载体，PCR产物3末端具有一个非模板依赖的A，在连接酶作用下，把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。

2、根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。

3、TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。

4、使在PCR过程中扩增出的目的片段在得率上提高、特异性增强、浓度上提高等，说白了就是是最终产物的纯度增加，以便提高后续实验的成功率。

1、用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。如pGEM-3Z4Z载体由pUC1819增加了一些功能片段改造而来，大小为74kb。

2、T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。

3、克隆载体是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。

4、我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。

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