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引物稀释一般用什么液体
1、一般配制成较高浓度的母液(约100μM),保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。
2、当然可以。可是你的引物是RNA么,如果是DNA常规引物,买点娃哈哈纯净水,灭菌后就能用来溶解引物。
3、鼎国引物怎么稀释 一般用OD值乘10,单位是ul的纯水或TE溶解成100μM(忘了,也可能是nM)的液体。当然,开盖前要短暂离心,溶解后最好分装下。生工引物怎么稀释? 你的引物合成报告单上肯定有每OD含有的DNA的量的。
4、reverse:共2od,加100ul的缓冲液配成100uM的储存液 盖上盖后充分震荡混匀 工作液:从储存液中吸取10ul稀释至90ulDEPC水成10uM工作液。定量pcr实验:上下游引物各加1~2ul。内参GAPDH不用稀释。
5、TE是弱碱性,适合于引物的保存,引物若在酸性下比较不稳定。用H2O的话,更适合于后续的PCR操作。
6、为了保证PCR反应的准确性和特异性,需要在实验过程中适当稀释引物。引物的稀释倍数可以根据实验要求和引物的浓度进行调整,引物的浓度应该在0.1-1μM之间。
dna引物稀释用娃哈哈吗
rpm离心1min后加入ddH2O,涡旋震荡1min后瞬时离心甩一下即可。加水量根据你需要的浓度确定。
当然某些化学实验室也用石英器皿中的三次蒸馏水作为一级水 我们实验室配缓冲溶液和培养基用双蒸水(二级),配一般的酸、碱、盐用三级水,稀释引物、PCR之类的小量用水都是去离子水(每次不超过5mL的算小量)。
用TE(或ddH2O)稀释,按引物合成报告单上写的先稀释到100uM(一般有To dissolved into 100uM,add XX ul water...,不过注意一下是1OD的还是一管的,一般指1OD加这么多),作为贮存液。
一般来说,如果你定的引物是1OD的话,直接加入每OD×10倍的水,就可以得到100uM的DNA溶液。举个例子,比如你的引物是5nmol/OD的,那么加入50μL的水,可以得到100uM的DNA溶液。
合成公司交给你的引物成品一般是会注明有几个OD。正常一管引物干粉都是1个OD,相当于33μg。
大家溶解引物是用dd水还是TE缓冲液
用灭菌DEPC水以保证没有RNAse降解你的模板RNA,不要用含有EDTA的buffer,包括TEbuffer。EDTA会络合掉镁离子,从而干扰PCR反应。
两种都可以,看具体实验而定。一般而言常规pcr引物分两个浓度,一个是高浓度储存液,它是使用浓度的10x,高浓度储备引物用TE溶解;使用浓度的引物用灭菌的ddH2O稀释或溶解。
引物在溶解前,室温状态下都可以长期保存。使用pH5-0的TE 缓冲液溶解引物,在-20℃可以保存两个月甚至半年以上,-4℃保存两周一般也没有问题。
溶解引物时可以用的depc水代替双蒸水
如果是DEPC处理过的水,那就更好啦,不含DNA酶,比双蒸水更好。如果是含DEPC的水,理论上问题也不大,但是DEPC有毒,自己小心。
是用DEPC(diethyl pyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的超纯水(一级水),无色液体。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下:总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA,-20℃保存,备反转录之用。反转录。
DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水,无色液体。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。
【求助】请问引物合成后,该怎样保存,使用时该怎样稀释?
1、引物在溶解前,室温状态下都可以长期保存。使用pH5-0的TE 缓冲液溶解引物,在-20℃可以保存两个月甚至半年以上,-4℃保存两周一般也没有问题。
2、◆干粉引物溶解稀释方法:收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。
3、这种关系看图一目了然,文字半天也说不清楚。请楼主直接搜索PCR原理图片。引物如果冻干状态可以在-20oC保存很久。如果用TE缓冲液溶解后需要分装,仍保存在-20oC,用时取一小支,稀释到使用倍数,避免重复解冻。
做配药品,稀释引物,PCR实验中,对水的要求要很高么
稀释引物、PCR之类的小量用水都是去离子水(每次不超过5mL的算小量)。
在前PCR区建立PCR混合物。⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
储备液一般是100uM,也有稀释成10uM的。反正做PCR的最终其工作液终浓度范围是0.2μmol/L左右。我一般把引物稀释成10uM,25微升PCR体系一般加0.4-0微升的引物。
引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决。
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