朋友们，你们知道为什么连t载体这个问题吗？如果不了解该问题的话，小编将详细为你解答，希望对你有所帮助！
T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?
1、我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。
2、t载体就是T-DNA，是一类可以重组到受体生物染色体上的载体，通常被应用于植物的基因重组过程中。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A)，与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。
3、T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。
4、pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。
为什么pcr产物可以直接连t载体
1、普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。
2、基于这个原理，常规的线性T－克隆载体（PUC18和PUC19等）在其3’末端添加一个T，这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆，并不需要添加任何特异性的粘性末端位点。这个就是T克隆的原理了。
3、一是TA连接，如phusion，高保真的taq，PCR后会有一个A末端，和T载体的T末端互补相连。另一是平末端连接，如pfu，PCR后是平末端，可以和blunt II vector这一类的载体直接相连，但顺序是随机的，可能是正的，也可能是反的。
4、TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。
T载体克隆的实验原理
1、连接反应通常将两个不同大小的片断相连。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。
2、实验原理重组质粒的构建T质粒载体重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。
3、TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。
4、克隆技术已展示出广阔的应用前景，包括以下四个方面：（1）培育优良畜种和生产实验动物；（2）生产转基因动物；（3）生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法；（4）复制濒危的动物物种，保存和传播动物物种资源。
5、我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。
6、克隆实验的实施促进了遗传学的发展，为“制造”能移植于人体的动物器官开辟了前景。克隆技术也可用于检测胎儿的遗传缺陷。将受精卵克隆用于检测各种遗传疾病，克隆的胚胎与子宫中发育的胎儿遗传特征完全相同。
为什么pcr产物要先连在t载体上
先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化，容易连接片段（也就是效率较高），因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确（商业化的缘故），因此测序也方便一些。
普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。
基于这个原理，常规的线性T－克隆载体（PUC18和PUC19等）在其3’末端添加一个T，这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆，并不需要添加任何特异性的粘性末端位点。这个就是T克隆的原理了。
连接反应通常将两个不同大小的片断相连。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。
T载体连接问题
PCR产物片段链接到T载体上后，PCR片段是会出现两种连接方向。如果用1%的琼脂糖电泳30min，主带（超螺旋的闭环质粒dna）会在3kb-2kbmarker之间，如果是单酶切产物，则应该在5kb的marker附近。
T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。
传统方法，也是最经典方法.利用常规taq酶在pcr产物3末端多加上一个碱基A的特性，开发出3`末端突出一个T的线性化T载体。从而利用DNA分子AT互补配对进行连接提高克隆重组效率。拓展应用的方法。
不是。如果PCR末端加A的可以用T载体连接，pcr产物是平端，可以用平端载体连接，但效率低。PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。
t载能连大片段。用Taq酶做PCR是会在PCR产物两条链的3端加上一个A，基于此原理产物能通过t4DNA连接酶连入T载体，连载体时，产物的量要比载体的量大，一般比例要求在3比1及以上，2kb的片段还不算大太，一般还好连。
PCR产物纯化后测定DNA的浓度，按照适当的比例与T-Vector在含有连接酶的buffer中4°过夜或37°3小时连接，然后连接产物涂筛选平板（ALB)筛选即可。
小伙伴们，上文介绍为什么连t载体的内容，你了解清楚吗？希望对你有所帮助，任何问题可以给我留言，让我们下期再见吧。
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