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引物的设计原则
引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。扩增产物的单链不能形成二级结构。1引物应具有特异性。
引物设计有 3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。
引物设计原则是：引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp。引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。
设计PCR引物时,越少越好的是
1、引物设计是决定PCR反应成败的最重要因素。引物设计有两个主要考虑因素：特异性和扩增效率。特异性是由错配的频率决定的，特异性差的引物易产生错误的扩增产物。扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物达到理论最优的能力。
2、引物设计原则：长度： 18~30 bp， 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增；较长引物特异性强，但退火效率低，且易形成二级结构，从而导致PCR产量少。
3、引物对pcr的影响主要是特异性与效率两个方面：特异性引物才能够扩增出特异性条带，在引物设计时，需要对引物进行Blast，确保其特异性。扩增效率：引物一般反应浓度在0.2 μmol/L。
4、接下来，PCR反应循环同样会在这个复合体上进行扩增，最终得到所需的DNA产物。综上所述，引物从3到5还是从5到3的方向性，取决于你采用哪种方法来确认模板DNA序列。
5、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。遵循原则如下：引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。
6、引物设计原则长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。
引物合成
将预先连接在固相载体上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5羟基的保护基团DMT，获得游离的5羟基。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：通过PAGE凝胶电泳可以根据引物的大小和电荷差异进行分离纯化。引物在电场作用下从凝胶的负极向正极迁移，可以根据电泳迁移率选择目标带进行切割、提取。
合成的方向是由待合成引物的3’端向5’端合成的，相邻的核苷酸通过3’→5’磷酸二酯键连接，合成过程中会使用到合成试剂、合成单体、合成柱、DNA合成仪等等。
引物是人工合成的寡核苷酸序列，一般上下游各一段，一条引物可以与目的基因一端的一条DNA模板链互补，另一条引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。
PCR中Tm值如何计算?
长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 85 + 16 x Log10[Na+]+ 0.41 (%GC)–600/size 公式中，Size = 引物长度。
Tm值和G-C的含量可用二一个经验公式表示：（G—C）%=（Tm-63）×44 在一定条件下（pH0，0.165MNaCl中）Tm值与（GC）%含量呈正比关系。因此，通过测定Tm值，可以推算出DNA分子中的碱基百分组成。
PCR用引物的Tm值的计算方法？引物为20 mer以下时：Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C)引物为20 mer以上时：Tm = 85 + 0.41×(GC%) - 600/L其中L为引物的长度。
引物设计中150mer什么意思
Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度。寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大小。Tm 值 有 多 种 计 算 方 法 。
两引物之间尤其在3端不能互补， 以防出现引物二聚体， 减少产量。两引物间最好不存在4个连续碱基的同源性或互补性。
TaqMan 探针设计的基本原则是什么？下列原则供您参考。◆TaqMan 探针位置尽可能靠近扩增引物（扩增产物50-150bp），但不能与引物重叠。◆长度一般为18-40mer 。◆G-C含量控制在40-80%左右。
引物设计原则 长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。
这就是基因的差别表达（differential expression）。原理：利用两组特殊的引物对差别表达的基因进行扩增。3’端引物：利用mRNA的poly A尾巴设计。
引物的设计原则其中有两点：引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物之间不能有连续4个碱基的互补。
引物设计中的F、R表示什么?
正向引物，反向引物。引物自身及引物之间不应存在互补序列。连续互补的碱基应该要少于4 个。引物应使其G值不要太高，G值越大，则双链越稳定。引物长度和GC 含量要适中。
f。根据查询爱问知识人显示，f是上游，r是下游，上游引物：Forwardprimer，F-引物，又称为正向引物；下游引物：Reverseprimer，R-引物，又称为反向引物。
f 是上游，r是下游。上游是forward primer ，下游是reverse primer。上游引物：Forward primer，F-引物，又称为正向引物；下游引物：Reverse primer，R-引物，又称为反向引物。
F是正向引物，R是反向引物；M，U是你实验中的DNA片段的编号。
f是正向引物，r是反向引物，3是不是第三对引物，我也习惯把同一个基因的不同引物编号1，2，3，如需设计引物，可以微信搜索“为青生物”，由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务。
到此，以上就是小编对于引物长度mer和bp的区别的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
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