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蛋白纯化——His标签与GST标签

GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST 标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。

His 标签：His 标签是最常用的融合标签之一。这个标签通常在蛋白质的N-或C-端附加，通过其亲和性与金属离子结合，从而实现对融合蛋白的纯化和富集。GST 标签：GST 标签是常用的融合标签之一。

蛋白标签(Protein tag)技术是指利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽，蛋白质结构域，甚至完整蛋白质与目标蛋白融合在一起，以实现目标蛋白的表达纯化，检测和示踪等应用的技术。

GST标签较大，为26kd，而通常使用的是6*His标签很小，只有0.6kd多一点。

His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。随着越来越多的新基因的发现，基因融合蛋白表达体系以其在新发现蛋白研究中的显著优势已得到广泛应用。

下面是GST标签蛋白的常规纯化步骤：提取细胞：将经过重组后表达含有GST标签的目的蛋白的大肠杆菌进行培养，利用超声波破碎等方法将其破碎提取出蛋白。

标签抗体的主要类别

免疫标记分析技术主要包括：放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。

抗体可分为五类：IgG 、 IgA 、 IgM 、 IgD 、 IgE 。它们分别的功能主要有：（1） IgG ：是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。 IgG 还能激活补体，结合并增强巨噬细胞的吞噬功能。

辣根过氧化物酶(HRP)标记 辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。

鼠单抗，但是说明书里面没有验证信息，可以考虑一下义翘的myc抗体，标签的位置和偶联重组蛋白的类型都做过严格验证。

SIgA是外分泌液中主要的抗体类别，参与黏膜局部免疫，通过与相应病原微生物结合，阻止病原体黏附到细胞表面，在局部抗感染中发挥重要作用。SIgA在黏膜表面也有中和毒素的作用。新生儿易患呼吸道、胃肠道感染可能与IgA合成不足有关。

ANA的检测方法主要是以HEP-2细胞和鼠的肝组织为基质的间接免疫荧光法，其最大优势就是除了能够判断血清中是否存在自身抗体及其滴度，而且能够对自身抗体进行初步分类，这对于区分疾病有一定意义。

GST蛋白质纯化中STET平衡夜怎么保存

1、提取细胞：将经过重组后表达含有GST标签的目的蛋白的大肠杆菌进行培养，利用超声波破碎等方法将其破碎提取出蛋白。亲和层析：利用谷胱甘肽琼脂糖glutathione agarose等树脂与GST标签特异性地结合，纯化GST标签蛋白。

2、洗脱：添加适当的洗脱缓冲液，使GST融合蛋白从亲和树脂上解离并洗脱下来。洗脱后得到目标蛋白与GST的复合物。蛋白质分析：通过SDS-PAGE、Western blot等方法对洗脱后的复合物进行分析和检测。

3、金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。处理金属螯和柱料：1 平衡所有用到的材料于室温。2 搅拌金属螯和柱料 3 倒水进柱子，驱除气体。

4、很好保留了蛋白的 抗原 性和生物活性，提高外原蛋白的稳定性；高特异性，纯化方便且温和；分子量较大，可能会影响 蛋白质 的功能和下游实验；如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化。

gst标签蛋白的纯化步骤?

1、亲和纯化：将裂解液与含有GST的亲和树脂（如GST亲和树脂或GST beads）混合，让GST融合蛋白与亲和树脂上的GST结合形成复合物。复合物与其他非特异性蛋白质被洗脱液不断冲洗，以去除非特异性结合的蛋白质。

2、首先，你需要确定你的目的蛋白正确融合上了GST标签，建议先用anti-GST抗体对lysis上清做个western。当然如果你和你同学用的是同一个质粒的话，那么这一步就不必了。

3、gst beads纯化蛋白的方法叫做免疫亲和色谱法纯化蛋白 免疫亲和色谱法是指将特异性的配基偶联到基质上，然后通过这个配基去结合与之有特异性相互作用的蛋白。

4、（3）用GST Elution-Buffer洗脱目的蛋白，收集流出液；（4）收集的蛋白溶液加入透析袋中，使用Tris-HCl透析过夜；（5）进行SDS-PAGE分析和WB分析。

5、GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST 标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。

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