生工提取质粒p1p2p3作用-生工sanprep提质粒试剂盒-上海生物商贸有限公司

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质粒提取试剂盒中p1、p2和p3的作用

p1：葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca和Mg等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。

提取质粒用的5种buffer分别作用：buffer P1：除去RNA。buffer P2：裂解细胞。buffer P3：沉淀DNA。buffer WA、buffer WB：都是洗涤液。TE：溶解DNA。

醋酸溶液1称为悬浮液，是用来把细菌悬浮均匀的，为下一步的裂解做准备；溶液2称为裂解液，是裂解细菌菌体，使其释放质粒的，该步骤不能超过5分钟；溶液3称为中和液，用来中和溶液二继续裂解，避免基因组DNA的污染。

这个和50/100 runs一个意思，就是按照试剂说明里面的要求，可以用50次。但是如果你做实验的时候，按倍数减少体积，就可以多用几次。

厚百为您解T是指次，50T就是50次，表示这个试剂盒你可提50次，其他常见的还有react，preps，也是这个意思。厚百提供专业的实验室用品，地址栏输入holdbio到达。

P1作用是悬菌，使菌体分散。P2是强碱，作用是裂解菌体。

p2：此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。

1、质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法，该试剂盒使用的是碱裂解法（说明书 http：// ）。

2、在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。

3、挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mlLB培养液中，37℃150rpm培养过夜。取5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。

4、质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

5、通过离心沉淀，细胞破碎、染色体DNA及大部分蛋白质等可被出去，而质粒DNA及相对分子质量较小的RNA仍为可溶状态。混杂的RNA可用RNA酶消除，再用酚／氯仿处理，可除去残留蛋白质。

所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA(cccDNA)：质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA(ocDNA)：质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA(lDNA)：质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型。

如果DNA/凝胶熔液的体积超过700ul，一次只能转移700ul至柱子中，余下的可继续重3 / 9 复第5步至所有的溶液都经过柱子。每一个Hibind DNA回收纯化柱都有一个极限为25μg DNA的吸附能力。

通过离心沉淀，细胞破碎、染色体DNA及大部分蛋白质等可被出去，而质粒DNA及相对分子质量较小的RNA仍为可溶状态。混杂的RNA可用RNA酶消除，再用酚／氯仿处理，可除去残留蛋白质。

目前已研发出多种质粒提取试剂盒，实验操作简单，只需按照产品操作说明操作即可。不过对于其中主要试剂和作用的理解，能够避免实验过程中的一些问题，或者能够更好的解决问题。

质粒小提试剂盒（TIANprep Mini Plasmid Kit 离心柱型）--碱裂解法本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异地结合溶液中的DNA。

到此，以上就是小编对于生工提取质粒p1p2p3作用的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。