westernblot试剂配制,western blot溶液配制 -上海生物商贸有限公司

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一般是与转膜和显影的操作有关，转膜前尽量将膜平衡，并注意胶和膜之间避免气泡，显影时膜与X光片间也应避免气泡。

（1）配制一抗：按照一定比例稀释抗体，并将配好的抗体置于夹链袋中。（2）裁膜：将NC膜多余的部分裁去。

把一抗、洗涤和封闭的原因排除之后，仍然有整张膜发光，那就是发光液的质量问题。所以选择质量好的发光液关乎实验成败。

原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

操作步骤（一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。

原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体结合。

western blot实验操作步骤如下：准备样品 1）制冰，准备冰盒。2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔。

（1）转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。

WesternBlot基本原理及步骤如下：Western blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

ECL Western特异发光检测试剂盒用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。下面以engreen的超敏型ECL发光液Enlight-Plus为例，说一下检测实验步骤。常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。

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