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细胞凋亡的免疫学检测方法有哪几种(注意是免疫学的方法)
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。丫啶橙染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
2、而流式细胞术是非常重要的检测细胞凋亡的方法，不仅可以定性，也可以定量。流式细胞术检测细胞凋亡的方法也有很多，其中最重要是annexinV/PI双染色法。
3、用流式细胞仪或荧光显微镜直接观察PS外翻这一细胞凋亡的重要特征，是一种快速简便的细胞凋亡经典检方法。操作方法：染色液的配制：1) 取适量4x Annexin V结合液，用双蒸水稀释至1xAnnexin V结合液。
怎样鉴定细胞凋亡
1、根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
2、光学显微镜和倒置显微镜（1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。（2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。
3、主要特征是：细胞变圆，染色质凝聚、分块，胞质皱缩。之后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一些球形的突起，并在其基部绞断而脱落形成大小不等的内含胞质、细胞器及核碎片的凋亡小体，然后被周围细胞所吞噬。
4、，形态观察 坏死细胞：细胞膨胀，细胞质膜裂解，细胞器膨大，溶酶体破裂，水解酶释放到细胞溶质中使细胞内溶物分解导致细胞崩解，DNA随机断裂成不规则碎片，引起炎症。
5、所以可以用FITC偶联的annexinV鉴别凋亡细胞和活细胞。坏死细胞的PS也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面，annexinV也能识别坏死细胞表面的PS，所以 annexinV无法区分坏死细胞和凋亡细胞 。
6、) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测：PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生，可能作为免疫系统的识别标志。
活死细胞染料什么温度染色
根据最高上染温度的不同，生产上常把直接染料分成最高上染温度在70℃以下的低温染料，最高上染温度在70一80℃的中温染料和最高上染温度在90一100℃的高温染料。
、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）； T 胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
半年。细胞死活染色实验是其中一个简单的确认实验，利用活死细胞染色试剂盒，可以非常清晰的观察到细胞的生存状态，可以低温保存，零下20摄氏度避光保存，有效期半年。
染色时间15分钟以上，活细胞也会因为受损而着色。台盼兰染液不宜久存，陈旧者有毒性。） 苯胺黑(Aniline black) ：0。05%苯胺黑 Hanks溶液以 1：10量与细胞悬液混合1-2分钟后，镜检，死细胞着黑色。
可以进行活细胞染色，比如健那绿（线粒体）是为数不多的活细胞染色剂之一，就可以对活细胞进行染色，但大部分染色剂都不是活细胞染色剂，在染色过程中对细胞进行处理，改变细胞膜通透性，基本经过这个过程细胞就死掉了。
、结晶紫：结晶紫是碱性染料，能溶於水（溶解度9%）和酒精（溶解度75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。
如何用流式检测细胞凋亡
流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。
Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2：(AnnexinV+FITC)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞。
流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。
流式细胞仪和显微镜比较像，但能够对大量的单个细胞利用一组参数进行高通量的自动量化。固体组织需要在检测前制备成单细胞的悬浮液。
求细胞凋亡的一些系统的检测方法,最好全!谢了!
) 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像。结合Annexin V-EGFP 的凋亡细胞的质膜将显示绿色光圈；膜结构不完整的坏死细胞和晚期凋亡细胞在整个核区被PI染成红色而质膜为Annexin V-EGFP阳性呈现为绿色光圈。
细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
AnnexinV，一个钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在膜外侧的PS，再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用)，可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。
PS（磷脂酰丝氨酸）在胞外膜分布的检测 PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志。
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