质粒dna小量提取试剂盒说明书,质粒dna的小量提取及鉴定实验结果 -上海生物商贸有限公司

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植物基因工程实验技术-提取质粒

1、质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法，该试剂盒使用的是碱裂解法（说明书 http：// ）。

2、在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。

3、质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。RNA的去除，首先是使用RNase消化。

2、这一步的注意事项：首先，不要太久，因为基因组DNA片段在这样的碱性条件下会慢慢分解。第二，加入溶液2后，操作一定要轻柔，剧烈混合会导致基因组DNA污染。

3、本步骤注意事项：第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断也会慢慢断裂；第二，加溶液二后，操作一定要温和，剧烈混合会导致基因组DNA污染。

质粒小提试剂盒（TIANprep Mini Plasmid Kit 离心柱型）--碱裂解法本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异地结合溶液中的DNA。

小量提取质粒DNA的原理主要包括：裂解细胞和核糖体，释放出质粒DNA。常用SDS和蛋白酶K破坏细胞结构，裂解细胞和核糖体，释放出各种DNA，包括质粒DNA、宿主染色体DNA等。去蛋白。

质粒DNA 提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。

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