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植物基因工程实验技术-提取质粒
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法，该试剂盒使用的是碱裂解法（说明书 http：// ）。
在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。
挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mllb培养液中，37℃150rpm培养过夜。取5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。
质粒转化步骤
)取100ul新鲜制备的感受态细胞，加入质粒1ul DNA混匀，同时设置对照组(未加质粒，未加受体菌，已知具有转化活性的DNA)。冷冻的感受态细胞要在冰上解冻，待管中最后一点冰融化后，迅即加入DNA. 解冻感受态细胞温度高于0℃，会降低转化效率。
如果是穿梭质粒的话，提取出来直接转化感受态的农杆菌就好。步骤：农杆菌感受态细胞的制备 挑取少许农杆菌，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。
转化的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。
常用步骤 转染试剂的准备 ① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。
转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟，然后将5 ul质粒加入感受态细胞，放在冰上20分钟。再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟，然后迅速放回冰中静置3-5分钟。
质粒干粉用什么溶解
质粒干粉不能直接使用。根据查询相关公开信息显示，质粒干粉是一种DNA质粒制备形式，需要在适当的条件下重新溶解后才能使用。质粒干粉需要在无菌条件下，使用适当的缓冲液或水进行重新溶解。
首先根据实验需要选择适当的缓冲液，加入适量的蒸馏水或去离子水，将缓冲液的pH调整到适当的范围。其次将预先称量好的冻智粒缓慢加入缓冲液中，同时用磁力搅拌器搅拌。最后搅拌是十五分钟后即可溶解冻干质粒。
该分子可以水浴锅促溶。质粒是一种小型的DNA分子，可以在水浴锅中被促使溶解。通常情况下，在使用水浴锅时，需要将水加热到80℃左右，然后将带有质粒的样品置于水中，并轻轻搅拌样品，直到质粒完全溶解为止。
水溶性PBS，脂溶性DMSO。通过细胞培养的药物，如果是水溶性的药物就可以使用PBS进行溶解，如果是脂溶性的药物就可以通过DMSO进行溶解，在溶解之后需要使用PBS进行稀释，而且并不会影响脑细胞。
各位小伙伴们，我刚刚为大家分享了有关提取质粒试剂盒说明书的知识，希望对你们有所帮助。如果您还有其他相关问题需要解决，欢迎随时提出哦！
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