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ELISA试剂盒免疫荧光技能大全
点击次数:214 发布时间:2017/8/25

ELISA试剂盒免疫荧光技能首要靠观察标本的染色结果进行抗原的判定和定位,因而标本的制造十分重要。在制造标本过程中应力求坚持抗原的完整性,并在染色、洗刷和包埋过程中不发生溶解和变性,也不分散至附近细胞或安排间隙中。标本要求尽量薄些,以利抗原抗体触摸和镜检。标本中搅扰抗原抗体反响的物质要充沛洗去,有传染性的标本要注意安全。
一:标本的处理
涂片和印片   血液、细菌培养物、脑脊液、体腔渗出液和细胞悬液等均可简略地涂改在玻片上,枯燥固定后就可用于荧光抗体染色。脑脊液、脏器(肝、脾、淋巴结等)、细菌菌落或尸身病变安排可把切面压印于玻片上作成印片,经固定后再染色。
安排切片   这是安排学和细胞学最常用的显微镜标本片。首要有以下两种:①冷冻切片:为了使抗原最大量的保存,首选的制片办法是冷冻切片,其长处是操作简略,安排的抗原性保存好,自发荧光较少,特异荧光强,一起适用于不稳定的抗原,缺陷是安排结构欠明晰。②白腊切片:白腊切片是研讨形状学的首要制片办法,它不可是观察安排结构的抱负办法,并且可进行回忆性研讨。其长处是安排细胞的精细结构闪现清楚,但对抗原的保存量不如冷冻切片,并有安排自发荧光和非特异性荧光,需加酶消化处理。
ELISA试剂盒细胞培养标本   用HEP-2细胞或Hela细胞培养,待细胞在玻片上形成单层,固定后用作抗核抗体等检测的抗原片。还可使细胞单层生长在玻片上,再用病毒或患者标本感染,然后固定,用荧光抗体染色法检测病毒。
活细胞染色    查看淋巴细胞外表抗原以及免疫球蛋白受体、癌细胞外表抗原、血清中抗癌细胞抗体等,均可用活细胞荧光抗体染色法。当一起观察细胞外表两种抗原的散布和相互关系时,可用双标记法进行染色。

二:标本的固定
标本固定的作用不只使细胞内蛋白质凝结,终止细胞内酶反响过程,避免细胞自溶,以坚持细胞固有形状和结构,更重要的作用是保存安排细胞的抗原性,避免标本从玻片上掉落,除掉妨碍抗体结合的类脂,易于保存。固定标本的原则应不损害细胞的形状、细胞内的抗原和细胞膜的通透性。
蛋白质类抗原如血清蛋白质和抗体,可用乙醇或甲醇固定;微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定;如需除掉病毒的蛋白质外壳,则可运用胰蛋白酶;多糖类抗原用10% 福而马林固定或以微火加热固定。如有粘液物质存在,使用透明质酸酶等处理除掉。类脂质丰厚的安排进行蛋白、多糖抗原检测时,需用有机溶剂处理除掉类脂。
三:标本的保存
ELISA试剂盒标本在固定枯燥后,最好当即进行荧光抗体染色及镜检。如有必要保存时,则应坚持枯燥,置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官安排切片经固定后可保存一个月以上。但病毒和某些安排抗原标本抗原性丧失很快,数天后就失去其抗原性,需在-20℃以下保存。

 
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