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T载体如何制备
试剂T 载体，T4 DNA 连接酶，连接酶缓冲液，无菌dd Water操作步骤PCR产物与T载体直接连接：（1） 事先将干式恒温仪（或冰盒里的水）温度设定在14~16°C。
【拼音】zài tǐ 【解释】指能传递能量或运载其他物质的物体。 在生物、化学以及IT等领域中，有其固有的含义。
方法：用限制性内切酶XcmⅠ酶切，在两端产生T末端，制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。
怎样克隆启动子和测定其序列?步骤尽量说详细点
1、先要提取人的基因组DNA（有提取试剂盒可以很方便），根据低等生物基因序列设计PCR引物，再用引物和基因组DNA做PCR。再用PCR产物做克隆并测序。
2、现将你已知基因ORF上游的片段扩增出来，插入启动子探针载体筛选基因的上游，转化宿主菌后观察筛选基因是否表达，如果表达则说明插入片段有启动子活性，再逐渐减少插入的片段逐步找出活性中心。
3、一般来说所用的分析工具有在线跟下载的 下面简要列举一些常用在线软件的使用 使用VecScreen工具，分析下列未知序列，输出序列长度、载体序列的区域、可能使用的克隆载体都有哪些。
基因做表达实验必须要克隆全长吗
1、只需要囊括cds序列，只要有两端的基因序列就可以了，它自己复制。
2、如果你700bp的片段都要表达，你当然要扩增全长啊。
3、dna测序过程，其实是pcr的过程，你只要有足够的模板用于pcr反应就行，不一定要克隆到载体上。
4、也必须考虑到引物合成中不可避免的偶发错误，克隆到载体再测序可以清楚的检测。再者，还有比如引入酶切位点，正反向连接等特定实验要求的考虑。其实我一般都是PCR后直接测序的，因为我多数的实验不做后续表达实验且序列已知。
PCR产物怎么做TA克隆
只有用经过特殊处理的具有3-t突出末端的dna片断才能通过t/a配对进行连接。
如果使用普通的T载体是不行的，必须要加A，但是有的公司，比如全式金公司的blunt T载体，它是平端的。可以直接连接这种平末端的PCR产物而不需加A。
使得Taq酶的PCR产物或经过Taq酶加A的PCR产物，和一个人工加上一个3末端具有1个T的载体进行连接，由于突出末端可以互补，这样可以大大提高目的基因和载体的连接效率，这样的克隆称作T-A克隆。
TA克隆的定义是什么?
TA克隆 把PCR片段与具有3-T突出端的载体DNA连接起来的实验方法。T载体是带有3-T突出端的开环载体，PCR产物3末端具有一个非模板依赖的A，在连接酶作用下，把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。
根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。
TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。
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