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定点突变的介绍
【答案】：定点突变是在基因精确限定的位点引入突变，包括删除、插入和置换特定的碱基序列，从而得到含变异序列的突变基因。
体外定点突变技术是当前生物、医学各领域研究中的一种重要实验手段，是改造、优化基因的便捷方案，是探索启动子调节位点的有效手段，也是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具。
通过多聚酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段中引入所需变化（通常是有利的），包括碱基对的增添、缺失和替换等。定点突变能迅速，高效地改变DNA所表达的目的蛋白，从而影响生物性状，是基因研究工作中一种非常有用的手段。
一样。根据查询定点诱变和定点突变性质得知，利用人工合成的寡聚核苷酸在离体条件下制造任何部位的位点异性突变的技术通常称为定点突变或称定点诱变，两者性质相同。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。
随机性和有害性。随机性。随机突变是不定向的，是随机的，且突变频率非常低，定点突变是定向的，是确定的。有害性。
如何利用pcr技术进行基因定向突变
如要扩增的基因有一段序列是ATGCCGT，普通PCR引物应该是TACGGCT，但是要定点突变的话，就在引物中将要突变的那位点改成突变的碱基，如变成TACHGCT。
将两个片段的回收产物混合，用重叠PCR扩增得到全长。这样就通过在中间引物上设计突变的方式达到定点突变。采用重叠引物PCR介导的定点突变实验是一种快速有效的在基因中特定位点引入特定突变的有效技术。
通过多聚酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段中引入所需变化（通常是有利的），包括碱基对的增添、缺失和替换等。定点突变能迅速，高效地改变DNA所表达的目的蛋白，从而影响生物性状，是基因研究工作中一种非常有用的手段。
利用寡核苷酸介导的定点突变设计引物时,应注意什么
1、人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。
2、引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。
3、避免二聚体和自身互补：设计引物时需要避免两个引物之间形成二聚体或自身互补，这会影响PCR效率和特异性。 进行特异性检测：使用软件工具进行特异性检测，以确保所选引物只扩增目标DNA序列而不扩增其他非特异性DNA。
4、引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。
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