哈喽！相信很多朋友都对转化产物为什么加无抗性LB不太了解吧，所以小编今天就进行详细解释，还有几点拓展内容，希望能给你一定的启发，让我们现在开始吧！
做转化时无抗性摇菌目的
电转化感受态细胞实验流程划单菌落：倒一个普通的无抗性的LA培养皿，利用感受态菌株，划单菌落，37℃培养约15hrs（推荐时间：第一天8：00am-11：00pm）。
另外，抗性基因和标记基因（如营养缺陷基因）给予菌体以选择压力，有利于质粒在菌体内的大量扩增。
转化后，大肠杆菌的细胞膜通透性增强，不利于大肠杆菌的生长繁殖，温育的过程是它恢复活力的过程，这时用的培养基是不含抗生素的，不然的话抗生素容易进入细胞内，对细胞的生长不利。
准确地说，细菌就算软入重组质粒，质粒上的抗性基因也不能马上表达，所以细胞还不具有抗性，细胞比较脆弱，不能在复苏时加抗生素，否则，细菌都死掉了。。
转化子为什么在LB液体培养基上培养不出来
可能是溶氧的问题：液体培养基含氧量较固体培养基低. 也有可能是培养基的问题：比如拿lb固体培养基培养长得良好，但是用LB的液体培养基就长不出来或是很少，后来换做营养肉汤培养基就长的非常好。
可能原因有很多，需要现场具体情况具体分析。例如，菌液中的细菌已经死亡，操作不当，培养条件不对，培养基质量问题等等。大肠杆菌的营养要求实际上并不高，使用普通营养条件的培养基，就可以比较容易地将其培养出来。
可能是平板有问题，也就是说平板上长的单克隆不是需要的抗性；可以用新鲜平板划线，如果能长，再从新平板上挑单克隆摇菌；如果不长，说明原来平板上的单克隆不对。
若平板上只是零星长了几个菌落，则可以考虑是杂菌或活性不好的转化菌。个人认为固体氨苄培养基的环境比液体氨苄培养基优越的多，这也是为什么长时间冻存的菌会先划平板活化一下的原因。
当质粒加入宿主细胞进行转化,为什么在涂布含有Amp的LB培养基平板前要...
1、一般认为，感受态细胞制备过程和质粒转化过程会使宿主细胞活力受损，所以在转化完后，会在lb培养基中活化一小时，使细胞恢复活力。
2、一般认为，感受态细胞制备过程和质粒转化过程会使宿主细胞活力受损，所以在转化完后，会在LB培养基中活化一小时，使细胞恢复活力。
3、另一株转入类似长度、不带氨苄抗性基因的质粒，为氨苄敏感株大肠杆菌，以下简称Amp-s(Ampicillin sensitive)，取200μL。（细菌密度：OD约0.6-0.8)过程：以下操作都在超净台中进行。
酵母电转化感受态细胞原理
1、电转化感受态细胞原理如下：电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。
2、两种方法的原理不同：电击法： 使用瞬时高压电（数千伏特）处理细胞悬液，微生物细胞膜在高压电的作用下发生去极化，产生微孔，悬液中溶解的核酸即可通过细胞膜上的孔洞进入细胞内部。
3、感受态细胞转化原理：主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。
4、电激法是利用瞬时、高强度的电场作用，对生物膜形成可逆的通透性，细胞膜在电脉冲作用时形成微孔，同时摄取外源DNA分子，从而获得遗传转化。
...再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素
活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让大肠杆菌迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入抗生素会细胞会死亡。
因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物，加入抗生素会把细胞杀死。
准确地说，细菌就算软入重组质粒，质粒上的抗性基因也不能马上表达，所以细胞还不具有抗性，细胞比较脆弱，不能在复苏时加抗生素，否则，细菌都死掉了。。
是不应该加的。热激就是让菌体瞬间热胀，表面蛋白掉下来形成通道，质粒才能进去，这个过程对细菌是有伤害的。菌体42度热激之后很脆弱。
Ca离子沉聚在细胞膜表面会使得细胞膜呈一种液晶的状态，这种状态便于在热激条件下形成缝隙，便于转化质粒。
大肠杆菌感受态制备时为什么用无抗性的培养基?
活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让大肠杆菌迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入抗生素会细胞会死亡。
因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物，加入抗生素会把细胞杀死。
保菌用抗性培养基，肯定是要加菌种本身的抗性的，这样为了防止菌种的退化，维持菌种抗性的稳定存在。那些退化的菌种在抗性的条件下就被淘汰了。
一般制备感受态细胞时使用的培养基不需要加抗生素。因为感受态细胞特别脆弱，很容易被抗生素杀死。
（1）挑取大肠杆菌单菌落，接种于5 ml无抗生素的LB液体培养基中，37℃下振荡培养13h，至对数生长后期。将该菌悬液以1：50 的比例接种于100 ml LB 液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至OD600＝0.5。
首先要明白加氨苄等抗生素的目的是筛选，只有能够表达抗性基因的细菌才能生存。其次，做感受态的目的是为了扩大培养细菌，并不是筛选。最后又加抗生素的目的是看带有相应抗性基因的质粒有没有成功转到细菌中。
各位小伙伴们，我刚刚为大家分享了有关转化产物为什么加无抗性LB的知识，希望对你们有所帮助。如果您还有其他相关问题需要解决，欢迎随时提出哦！
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