朋友们，你们知道ta克隆测序是什么这个问题吗？如果不了解该问题的话，小编将详细为你解答，希望对你有所帮助！
TA克隆的具体原理是什么?
1、Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。
2、PCR克隆是将目的基因经过PCR扩增后直接连接在载体上的克隆技术，相对于传统分子克隆，PCR克隆有着其独特的优势，不需要特意寻找合适的酶切酶；不需要使得目的基因和载体之间兼容匹配；需要较少的DNA等。
3、大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3末端添加一个 A 的特性，故可以与有突出“T”的载体相连，这就是TA克隆的原理。
4、BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。
5、Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA 拓扑异构酶I。
6、根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。
什么是T-克隆载体和U-克隆载体?
用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。如pGEM-3Z4Z载体由pUC1819增加了一些功能片段改造而来，大小为74kb。
T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。
克隆载体是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。
我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。
ta克隆的优缺点
（3）TA克隆选择灵活，如果一个位点不好使用，同一批质粒还可以用其他酶再切，随时可以扩增。（4）方便下游作业，比如说要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。缺点：（1）PCR产物的酶切和判断比较困难。
优点：不需要引物和特定的酶切位点序列，简单方便。缺点：加大酶切位置的判断难度，过长的片段会导致克隆效率的降低。
TA克隆的好处在于选择灵活，万一一个位点不好使，同一批质粒还可以用其他酶再切。随时可以扩增。还有方便下游作业，比如说你要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。所以2种方法各有优缺点，你可以根据情况选用。
优缺点 蓝白斑筛选测定 利用DNA聚合酶扩增lacZ基因，它可以还原β-半乳糖苷酶基因活性并产生蓝色菌落，结合蓝白斑筛选的结果可以评估保真度。快速、相对简单、经济有效；但是精确度不高，无法区分DNA的同义突变。
-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序列。
min），然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；2 具体的克隆方法，参考所用T载体的说明书。比如TAKARA的pMD-19T，百度一下，里面有详细的介绍和注意事项。
TA克隆后如何分析测序结果?
假设你测的是一个基因的序列，如果已知这个基因的序列，则将你测序得到的基因序列与已知的序列相比对，分析看两者在哪个地方不对应，不对应的地方即为突变的地方。比对的软件有sequencher，或者去ncbi网站点击blast进行。
首先，看测序峰图，如果结果的彩图显示峰型是尖锐单一的，碱基所对应的编码是一致的，那么可以判断序列是可以使用的。如果出现双峰，信号中断等异常现象，那么需要重新制备或者克隆后再测序。
如果菌体克隆切开了，空载切不开，才能说明找到了阳性克隆。送去测序才比较可靠。否则直接送去测序，很可能全是空载，白白耽误时间。
还有一段距离，因此就可以得到您的完整的引物序列。由于在测序的起始端总会有一些碱基无法准确 读出，因此，您如果想得到您的pcr产物的完整序列，最好克隆后进行测序。
TA克隆的定义是什么?
TA克隆 把PCR片段与具有3-T突出端的载体DNA连接起来的实验方法。T载体是带有3-T突出端的开环载体，PCR产物3末端具有一个非模板依赖的A，在连接酶作用下，把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。
根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。
TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。
构建TA克隆,为什么测序结果老是空载体
1、-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序列。
2、当DNA碱基中含GC含量高的时候，从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去。这样的情况，建议可以尝试换用反向引物进行测序。或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序，可以根本上解决测序信号中断的问题。
3、如果菌体克隆切开了，空载切不开，才能说明找到了阳性克隆。送去测序才比较可靠。否则直接送去测序，很可能全是空载，白白耽误时间。
4、第一个问题，只有一个碱基缺失，克隆测序和引物合成都没有问题；第二个问题：酶切连接入载体后，克隆过程就完成了；第三个问题：如果你说的是转化过程的话，应该是先做好连接，再做转化。
5、使得Taq酶的PCR产物或经过Taq酶加A的PCR产物，和一个人工加上一个3末端具有1个T的载体进行连接，由于突出末端可以互补，这样可以大大提高目的基因和载体的连接效率，这样的克隆称作T-A克隆。
小伙伴们，上文介绍ta克隆测序是什么的内容，你了解清楚吗？希望对你有所帮助，任何问题可以给我留言，让我们下期再见吧。
微信扫一扫打赏
