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多种类型的elisa检测样本
点击次数:516 发布时间:2017-09-07

一般我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培育上清或安排匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理办法是不一样的。正确的处理样本是确保ELISA检测的正确性和准确性的*步,下面简略介绍一下不同类型的样本的处理办法。
1、  细胞裂解液

a)  吸去培育板内的培育基,用胰酶消化细胞,加适量培育基将细胞从培育板上吹下来。悬浮细胞可省掉。

b)  搜集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培育基,用预冷的PBS润洗3次。

c)  参加适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前参加蛋白酶按捺剂)重悬细胞。一般6孔板一个孔的细胞量需求150~250μL PBS重悬。

d)  将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温冻结样品,重复冻融几回,使细胞充沛裂解。也可将样品进行超声破碎,以到达裂解的意图。

e)  4℃ 10000×g 离心10min,除掉细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。

2、安排匀浆液

a)  将安排样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲刷,洗去安排外表残留的血液或杂质。

b)  将安排块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充沛

c)  将安排按一定的份额参加预冷的PBS(临用前参加蛋白酶按捺剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS体积=1:9的份额匀浆,例如1g的安排样本对应9mL的PBS,详细体积可根据试验需求恰当调整,检测后核算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)

d)  汲取匀浆液到离心管,4℃ 5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。

3、  血清

血清是zui常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简略。

用无热原、无内毒素的试管或离心管搜集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清分出。(zui好将试管或离心管歪斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g离心20分钟,细心搜集上清。主张将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。

采血过程中应防止溶血,由于红细胞裂解时会开释具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为符号的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。一起也应防止细菌污染,由于菌体内可能含有内源性的HRP然后导致检测的假阳性。

4、  血浆

用含抗凝剂的采血管或离心管搜集血液标本,标本搜集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。防止运用溶血或高血脂的标本。

常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应细心阅读试剂盒说明书,查看试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。

5、  细胞培育上清

取细胞培育上清到离心管,1000×g离心20min,除掉细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。
6、  尿液、唾液等其他液体生物样本

1000×g离心20min,取上清即可检测。

总的来说,由于ELISA只能检测可溶性蛋白的含量,所以应确保所有样本均为弄清的液体,沉积或悬浮物都应离心去除。

为了确保检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本zui好在1~6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。

别的,还应确保样本不含NaN3,由于NaN3会按捺HRP的活性,然后导致假阴性的结果。

 
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